对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus, IHHNV)是影响全球对虾养殖业的重要病原体之一。该病毒主要感染斑节对虾、南美白对虾等经济品种,导致幼虾生长迟缓、畸形及死亡率上升,严重威胁养殖效益。由于IHHNV潜伏期长、传播途径多样(如垂直传播和水平传播),其早期检测与防控成为行业关注的核心问题。科学规范的病毒检测不仅能减少经济损失,还可避免病原体扩散至野生种群,维持生态平衡。
IHHNV检测的核心项目包括病毒核酸、特异性抗原及病理学变化分析。具体涵盖以下内容:
1. 病毒核酸检测:通过分子生物学方法检测对虾组织中的IHHNV DNA,确定感染状态。
2. 抗原检测:利用免疫学技术(如ELISA)识别病毒蛋白,判断病毒活性。
3. 病理学检查:观察鳃、肝胰腺等组织的细胞坏死、核肿大等典型病变。
4. 环境样本检测:对水体、饲料等可能携带病毒的介质进行筛查,阻断传播链。
目前IHHNV检测主要依赖以下三类技术:
1. PCR检测法:包括常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR(qPCR),具有高灵敏度和特异性,可检测极低浓度的病毒核酸,适用于早期诊断。
2. 环介导等温扩增(LAMP):无需复杂设备,可在恒温条件下快速扩增病毒DNA,适合现场或实验室快速筛查。
3. 免疫学检测:如酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学法(IHC),用于检测病毒抗原或抗体,辅助判断感染阶段。
IHHNV检测须遵循国际及国内标准化流程,确保结果准确性:
1. 国际标准:参考世界动物卫生组织(OIE)《水生动物疾病诊断手册》中IHHNV检测指南,明确样本采集、保存及检测阈值要求。
2. 国家标准:依据《GB/T 25878-2010 对虾传染性皮下和造血器官坏死病诊断规程》,规范PCR引物序列、反应条件及结果判定标准。
3. 样品处理规范:活体对虾需取肝胰腺、鳃或泳足等组织,采用无菌操作;死亡个体应在24小时内完成检测,避免腐败影响结果。
4. 结果验证:阳性样本需通过测序或重复试验确认,排除假阳性干扰。
通过上述检测项目、方法和标准的系统实施,可有效防控IHHNV的传播,保障对虾养殖业的可持续发展。