赤羽病（Akabane Disease）是由赤羽病病毒（Akabane virus，AKAV）引起的一种以牛、羊等反刍动物为主要宿主的虫媒性传染病，主要通过库蠓等吸血昆虫传播。该病以流产、死胎、先天性关节弯曲及无脑症等胎儿畸形为典型特征，对畜牧业生产造成严重经济损失。近年来，随着全球气候变化和跨境动物贸易的增加，赤羽病的流行区域呈现扩大趋势。开展精准、高效的赤羽病检测工作，对于早期发现疫情、制定防控策略以及保障畜牧业健康发展具有重要意义。
赤羽病的实验室检测主要围绕病毒、抗体及病理变化三个维度展开：
1. 病毒学检测：通过分离鉴定病毒或检测病毒核酸，直接确认感染状态。适用于急性期病例、流产胎儿组织或媒介昆虫样本。
2. 血清学检测：检测动物血清中的特异性IgG/IgM抗体，用于追溯感染史、评估群体免疫状况或验证疫苗接种效果。
3. 病理学检测：对流产胎儿进行组织病理学观察，发现脑空洞化、脊髓神经元缺失等特征性病变，辅助诊断。
病毒分离培养：将病料接种于Vero、BHK-21等敏感细胞系，通过细胞病变效应（CPE）观察结合免疫荧光技术（IFA）确认病毒存在。该方法特异性高但耗时较长（需5-7天）。
RT-PCR/实时荧光定量PCR：针对病毒S或L基因片段设计引物，可快速（2-4小时）检测样本中的病毒RNA，灵敏度达10^2拷贝/μL，尤其适用于早期诊断和批量筛查。
ELISA检测：使用重组核蛋白（N蛋白）或灭活全病毒作为包被抗原，通过间接ELISA法检测血清抗体，具有高通量、低成本优势，适用于大规模血清学调查。
病毒中和试验（VNT）：通过测定血清中和病毒的能力评估抗体效价，被视为抗体检测的“金标准”，但需在BSL-2实验室操作。
国际标准：世界动物卫生组织（WOAH）在《陆生动物诊断试验手册》中明确规定了病毒分离、RT-PCR和VNT的操作规范，要求阳性判定需至少两种方法相互验证。
国家标准：我国GB/T 35909-2018《赤羽病诊断技术》详细规定了临床诊断、病毒分离、RT-PCR和ELISA检测的技术流程，要求检测实验室需通过CNAS认证，PCR检测需设置内参对照防止假阴性。
质量控制要求：病毒分离需同步进行空白对照；分子检测要求Ct值≤35且熔解曲线单一峰；ELISA检测的阴性对照OD值需＜0.2，阳性对照＞0.8，临界值（CO值）按阴性均值+3SD计算。
1. 样本采集需遵循生物安全规范，流产胎儿组织应冷藏运输，血清样本避免反复冻融
2. 抗体检测需注意窗口期：IgM抗体在感染后7-10天出现，IgG抗体可持续数年
3. 流行区域建议采用“病原检测+抗体监测”组合策略，区分急性感染与既往感染
