急性经口毒性实验是评估化学物质、药物或新产品安全性的重要毒理学检测手段，通过观察实验动物单次或24小时内多次经口摄入受试物后产生的毒性反应，确定半数致死量（LD50）和毒性分级。该实验可为产品标签警示标识制定、危险化学品分类及药物安全性评价提供关键数据支持。检测项目主要涵盖存活率监测、中毒症状观察、体重变化追踪、病理组织学检查四大模块，采用改良寇氏法、霍恩氏法等经典检测方法，严格遵循OECD 423或GBZ/T 240.3等国际/国家标准规范。
实验前需完成动物适应性饲养（SPF级昆明种小鼠，体重18-22g）、受试物溶解体系筛选（水/油/羧甲基纤维素钠混悬液）及预实验设计。预实验通过5只小鼠梯度剂量测试确定0-100%死亡率范围，采用几何级数确定正式实验的4-5个剂量组，相邻剂量比通常设定为0.65-0.85。实验室需配备精确电子天平（精度0.1mg）、专用灌胃针（不锈钢钝头，直径1.2mm）及生物安全型解剖操作台。
1. 中毒症状动态监测：前8小时实施密集型观察（15分钟/次），记录流涎、震颤、呼吸抑制等17项中毒表征，采用改良的Irwin神经行为评价量表进行症状分级。
2. 生存状态追踪：持续14天记录死亡时间点，绘制Kaplan-Meier生存曲线，特别注意48小时内的急性死亡高峰。
3. 体重变化分析：使用精密电子秤每日称量，计算体重变化率公式：（终体重-初体重）/初体重×100%。
4. 病理学检测：解剖后取肝、肾、胃肠组织进行10%福尔马林固定，石蜡包埋切片（4μm厚度），HE染色后镜检病变情况。
限量法：适用于低毒物质检测，设定5000mg/kg上限剂量，若死亡率<50%则判定实际LD50>5000mg/kg。
序贯法：采用上下剂量交叉调整策略，每个剂量组仅需1只动物，大幅减少实验动物使用量。
Bliss法：通过概率单位回归建立剂量-反应曲线，计算LD50及其95%置信区间，适用于精确毒性分级需求。
固定剂量法：参照OECD 420标准，选择5/50/500mg/kg三个固定剂量，根据观察效应类别判定毒性等级。
采用SPSS 26.0或GraphPad Prism 9进行数据处理，LD50计算需满足：①相邻剂量组呈现死亡率递增趋势 ②最高剂量组死亡率≥80% ③最低剂量组死亡率≤20%。通过Weil's检验法评估数据正态性，LD50的95%可信限计算采用Litchfield-Wilcoxon法。毒性分级依据GB 30000.18标准，将物质划分为剧毒（LD50≤5mg/kg）、高毒、中等毒、低毒、实际无毒五个等级。
动物质量控制：提供实验动物合格证（No. SCXK京2023-0012），确保禁食12小时后进行实验，自由饮水。
操作标准化控制：灌胃体积≤10mL/kg，针头插入深度3-4cm，给药后保持动物直立30秒防止反流。
环境参数控制：温度维持22±2℃，相对湿度55±10%，光照周期12h明暗交替，噪音<60分贝。
本实验需严格遵循3R原则（替代、减少、优化），当受试物pH≤2或≥11.5时应进行中性化处理，遇难溶性物质时需说明最大给药浓度下的暴露量。最终检测报告应包含各剂量组详细死亡数据、症状发生时间谱、脏器系数变化表及组织病理学图片，为后续亚慢性毒性实验设计提供剂量选择依据。
