非洲马瘟（African Horse Sickness, AHS）是一种由非洲马瘟病毒引起的急性或亚急性传染病，主要通过库蠓等吸血昆虫传播，具有高致死率和广泛传播风险。该病主要感染马属动物（马、骡、驴），但马匹的易感性最高，死亡率可达50%-95%。随着全球贸易和人员流动的加剧，非洲马瘟的跨境传播风险显著提升，对畜牧业经济、国际赛马产业和生物安全构成严重威胁。因此，建立科学、高效的检测体系是防控非洲马瘟的核心环节，也是国际贸易中动物检疫的重要依据。
非洲马瘟的实验室检测主要围绕病毒、抗体及病理变化展开，具体包括以下项目：
1. 病毒分离与鉴定：通过采集发热期动物的血液、脾脏或淋巴结样本，接种敏感细胞（如Vero细胞）或鸡胚进行病毒培养，结合电镜观察病毒颗粒形态。
2. 血清学抗体检测：利用ELISA（酶联免疫吸附试验）、补体结合试验（CFT）等方法检测动物体内特异性IgG抗体，判断感染史或疫苗接种效果。
3. 分子生物学检测：采用RT-PCR、实时荧光定量PCR技术扩增病毒核酸（如VP7基因片段），具有高灵敏度和快速诊断优势。
4. 病理学检查：对病死动物进行剖检，观察特征性病变如肺水肿、心包积液及消化道出血，并通过免疫组化法定位病毒抗原。
国际认可的检测方法包括：
1. OIE推荐方法：世界动物卫生组织（OHS）在《陆生动物诊断试验手册》中明确规定了病毒分离、血清中和试验（SNT）和竞争ELISA的操作流程。
2. PCR检测体系：基于病毒基因组保守区域设计引物，例如针对VP2基因的巢式PCR可区分不同血清型，检测限可达102拷贝/μL。
3. 胶体金免疫层析技术：现场快速检测试剂盒可在15分钟内完成病毒抗原筛查，适用于口岸检疫和基层监测。
全球主要采用以下标准规范检测流程：
1. OIE标准：要求实验室达到生物安全三级（BSL-3）标准，病毒分离需在P3实验室完成，阳性样本需通过基因组测序确认。
2. 欧盟法规：(EC) No 1266/2007规定输入马匹必须提供AHS抗体阴性证明，检测需使用欧盟认证的ELISA试剂盒。
3. 中国国标：GB/T 22915-2008明确规定了病毒分离、PCR和血清学检测的技术细节，强调检测结果需经省级以上实验室复核。
4. 结果判读标准：ELISA样本OD值大于临界值1.1倍判定为阳性；PCR检测需同时设立内参基因对照，Ct值≤35且出现特异性扩增曲线视为阳性。
通过上述检测体系和标准的实施，能够实现非洲马瘟的早期预警、精准诊断和疫情溯源，为全球马属动物疫病防控提供关键技术支撑。
