脾脏作为哺乳动物体内最大的外周免疫器官，在免疫调节、血液过滤和红细胞代谢中具有重要作用。淋巴组织则是机体免疫防御体系的核心组成部分，广泛分布于淋巴结、扁桃体及肠道相关淋巴组织中。对大鼠脾组织和淋巴组织进行系统性检测，不仅能够揭示其生理功能与病理改变的关系，还为免疫学、肿瘤学及感染性疾病研究提供重要实验依据。通过组织形态学观察、分子生物学检测和免疫组化分析相结合的方法，研究者可全面评估免疫细胞分布状态、炎症反应程度以及特定蛋白表达水平，这对建立疾病模型、评价药物疗效具有关键性作用。
实验需选用健康成年SD或Wistar大鼠，经麻醉后采用颈椎脱臼法处死。迅速取出完整脾脏及目标淋巴结（如肠系膜淋巴结），置于预冷的生理盐水中冲洗。固定时推荐使用4%多聚甲醛溶液，固定时间控制在24-48小时。组织脱水采用梯度乙醇（70%-100%）处理，石蜡包埋后制备4-6μm厚度的连续切片。需特别注意淋巴组织样本的脆弱性，操作过程中应避免机械挤压导致结构破坏。
1. HE染色分析：通过苏木精-伊红染色观察组织结构完整性，重点分析白髓与红髓比例、生发中心形成状态及淋巴细胞浸润情况。淋巴组织需特别关注皮质、副皮质区和髓质的分界清晰度。
2. 免疫组织化学检测：选择CD3、CD20、CD68等标记物分别定位T细胞、B细胞及巨噬细胞，抗体孵育时间需根据预实验结果优化。
3. 分子生物学检测：采用qPCR或Western blot技术定量分析TNF-α、IL-6等细胞因子表达水平，样本RNA提取建议使用脾组织边缘区以避免红髓干扰。
正常脾组织可见界限分明的白髓（淋巴鞘）和富含血窦的红髓结构。病理状态下可能出现白髓萎缩（如免疫抑制模型）、红髓纤维化（慢性炎症）或淋巴滤泡增生（抗原刺激反应）。淋巴组织异常主要表现为皮质区淋巴细胞减少、生发中心消失或异型淋巴细胞浸润，提示免疫功能紊乱或肿瘤性病变。定量分析时需设立正常对照组，采用Image-Pro Plus等软件进行统计学处理。
1. 组织固定时间不足会导致染色不均，过度固定可能引起抗原表位遮蔽；
2. 切片厚度需严格控制在5μm以内，过厚切片影响显微镜下细胞层次观察；
3. 免疫组化实验应设置阳性和阴性对照，排除非特异性染色干扰；
4. 分子检测需在取样后立即进行液氮速冻，避免RNA降解；
5. 数据分析需考虑大鼠品系、年龄及性别对免疫器官的基础影响。
该检测体系已广泛应用于自身免疫性疾病模型构建（如类风湿关节炎）、肿瘤免疫治疗评价及疫苗效价测试等领域。通过动态监测脾指数（脾重/体重比）和淋巴细胞亚群变化，可精准评估免疫调节剂的治疗效果。随着空间转录组学等新技术的应用，未来将实现更高精度的免疫微环境解析，为精准医疗提供理论支撑。
