食品全基因组测序(Whole Genome Sequencing, WGS)检测是一项利用高通量测序技术对食品样本中微生物的完整基因组进行测序和分析的先进检测方法。它通过解析微生物的全部遗传信息,能够实现高精度的物种鉴定、溯源分析以及毒力和耐药性评估。随着测序成本的下降和生物信息学分析工具的日益成熟,WGS技术已逐步应用于食品安全监控领域,成为传统检测方法的重要补充乃至替代方案。相比于仅针对特定基因或片段的传统分子生物学方法(如PCR技术),WGS能够提供更全面的遗传信息,有助于发现新的病原体、追踪污染源头以及监测微生物的进化变异。尤其在应对食源性疫情暴发时,WGS能够快速、准确地识别致病菌株,为精准防控提供关键依据,显著提升食品安全风险管理的效率和水平。
检测项目
食品WGS检测的主要项目聚焦于食品中可能存在的各类微生物病原体。常见的检测对象包括但不限于细菌(如沙门氏菌、李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、弯曲杆菌等)、病毒(如诺如病毒、甲型肝炎病毒)以及真菌(如产毒霉菌)。检测旨在完成对这些微生物的基因组从头测序或重测序,进而实现物种的精准确认、菌株分型、溯源分析以及毒力因子和抗生素耐药基因的鉴定。此外,对于转基因食品或成分复杂的加工食品,WGS也可用于成分鉴定和真实性验证。
检测仪器
食品WGS检测的核心仪器是下一代测序(Next-Generation Sequencing, NGS)平台。目前市场上主流的高通量测序仪包括Illumina公司的NovaSeq、MiSeq、NextSeq系列,Thermo Fisher Scientific公司的Ion Torrent系列(如Ion GeneStudio S5系统),以及Pacific Biosciences(PacBio)的单分子实时(SMRT)测序仪和Oxford Nanopore Technologies(ONT)的纳米孔测序仪(如MinION, GridION)。Illumina平台因其高通量、高准确度和较低的成本,在食品安全WGS应用中最为广泛。这些仪器能够快速产生海量的短读长或长读长序列数据,为后续的生物信息学分析奠定基础。
检测方法
食品WGS检测的典型流程包括以下几个关键步骤:首先是样品前处理与核酸提取,即从食品样本中富集微生物并提取高质量的总DNA或RNA(对于RNA病毒需先进行反转录)。其次是文库构建,将提取的核酸片段化,并连接上测序接头,制备成可用于测序仪上机的文库。然后是上机测序,利用上述NGS平台进行大规模并行测序,生成原始测序数据(raw reads)。最后是生物信息学分析,这是WGS检测的核心环节,通常包括数据质控、序列组装(将短序列拼接成完整的基因组或重叠群)、基因注释、物种分类、系统发育分析、单核苷酸多态性(SNP)分析以及毒力与耐药基因的挖掘等。
检测标准
食品WGS检测的标准化对于确保结果的可比性和可靠性至关重要。目前,国际上多个机构已发布相关指南和标准。例如,美国食品药品监督管理局(FDA)建立了基因组溯源网络(GenomeTrakr),并制定了用于食源性病原体WGS数据分析的标准操作流程。国际标准化组织(ISO)也发布了ISO/TS 21584:2021《分子生物标志物分析-用于微生物来源追踪的全基因组测序通用指南》。在中国,国家食品安全风险评估中心等单位也在积极推动相关标准的建立。这些标准通常对样本处理、核酸提取质量、测序深度、数据分析流程、数据存储与共享以及结果报告格式等方面做出了规范性要求,以确保检测过程的严谨和结果的有效性。
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