黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类强毒性、强致癌性的次级代谢产物,广泛存在于花生、玉米、大米、坚果等农产品及其制品中。由于其对人类和动物健康构成严重威胁,世界各国均对食品及饲料中的黄曲霉毒素含量制定了严格的限量标准。因此,建立准确、灵敏、高效的黄曲霉毒素定量测试方法,对于保障食品安全、维护消费者权益、促进农产品贸易具有至关重要的意义。
黄曲霉毒素定量测试的核心检测项目是针对不同种类的黄曲霉毒素进行准确定量分析。主要检测对象包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)和G2(AFG2)。其中,AFB1被世界卫生组织癌症研究机构列为I类致癌物,是毒性和致癌性最强的种类,通常是监测的重点。此外,在某些检测要求中,还会包括其代谢产物黄曲霉毒素M1(AFM1,主要存在于乳及乳制品中)的检测。
黄曲霉毒素的定量测试通常依赖于高灵敏度和高选择性的分析仪器。高效液相色谱仪(HPLC)联用荧光检测器(FLD)是目前最常用的仪器配置,因为大多数黄曲霉毒素在紫外光激发下能产生特征荧光,检测灵敏度高。为了进一步提升灵敏度和抗基质干扰能力,高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS)已成为目前最权威和主流的检测工具,它能够提供极高的选择性和准确的定性定量结果。此外,酶联免疫吸附测定法(ELISA)所使用的酶标仪也常用于大批量样品的快速筛查。
黄曲霉毒素的定量测试方法主要包括以下几个关键步骤:样品前处理、提取、净化和仪器分析。首先,样品需经过粉碎和均质化处理。随后,使用有机溶剂(如甲醇-水溶液或乙腈-水溶液)进行振荡或超声提取,将毒素从样品基质中分离出来。由于提取液中成分复杂,含有大量干扰物质,必须进行净化处理。免疫亲和柱净化法是当前国际公认的黄金标准方法,其利用抗原抗体特异性结合的原理,选择性富集黄曲霉毒素,有效去除杂质。净化后的样品溶液即可注入HPLC-FLD或HPLC-MS/MS进行分析,通过比对标准品的保留时间和特征离子(或荧光强度)进行定性和外标法或内标法定量。
为确保检测结果的准确性、可靠性和可比性,黄曲霉毒素定量测试必须严格遵循国家、国际或行业标准。国际上广泛采纳的标准包括国际标准化组织的ISO 16050:2003《食品-黄曲霉毒素B1的测定-免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法》和官方的分析化学家协会的AOAC官方方法。在中国,主要依据的国家标准有GB 5009.22-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》以及GB 5009.24-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1的测定》。这些标准详细规定了方法的适用范围、原理、试剂、仪器、分析步骤、结果计算和精密度要求,是实验室进行合规检测的根本依据。
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